| 药准字：H11150003 | 主要组成成分：提取试剂 | 适应症：病毒DNA/RNA提取 |
| 贮藏：室温（15-25℃） | 有效期：12月 | 生产企业：北京大有泰莱生物技术有限公司 |
磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒20150701版
一、产品内容
名称 | 数量 |
裂解液RLCK (Buffer RLCK) | 15 ml |
漂洗液PWC（Buffer PWC） | 18 ml |
漂洗液PWE（Buffer PWE） | 12 ml |
Proteinase K | 1 ml |
磁珠悬浮液G （MagAttract Suspension G） | 1 ml |
RNase-Free ddH2O(瓶装) | 8 ml |
无水乙醇 | 60ml |
异丙醇 | 5ml |
二、选配试剂
Carrier RNA
三、储存条件
所有的缓冲液置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，***时间的保存可置于2-8℃。Carrier RNA冻干粉能够在室温储存至有效期。溶于RNase-Free ddH2O中的Carrier RNA溶液，应置于-20℃冷冻保存；而Carrier RNA溶液加入缓冲液RLCK后，在2-8℃能保存最多48 h，请现用现配。
四、产品简介
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从50 μl血清、血浆、***、无细胞体液、细胞培养上清液、尿液或各种病毒保存液中分离纯化高质量病毒DNA/RNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程不涉及有机试剂，安全、便捷，提取的病毒DNA/RNA得***、纯度高、质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。
使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作，包括RT-PCR、荧光定量PCR等各种下游实验。
五、产品特点
简便快捷：1 h内即可获得高质量病毒DNA或RNA。
高通量：可整合磁棒法自动化仪器或移液法自动化仪器进行高通量提取实验。
安全***：无需酚/氯仿等有机试剂。
六、注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1、若裂解液RLCK中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
2、如需增加微量DNA/RNA得率，可使用Carrier RNA(310 ?g)（客户自备）。
七、Carrier RNA溶液的配制如下
1、Carrier RNA溶液：向装有310 μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310 μl RNase-Free ddH2O， 将Carrier RNA***溶解，得到终浓度为1 μg/μl的溶液，并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中，置于-20℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液，该溶液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3次。
注意：Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于裂解液RLCK中，必须先溶解在 RNase-Free ddH2O中，再溶解至裂解液RLCK中。
2、Carrier RNA工作液：根据样品的数量计算所需裂解液RLCK和Carrier RNA溶液的体积（见表1，按每75 μl RLCK加入0.7 μl Carrier RNA的比例进行配制），由于加样存在误差配制数量需比实际样品数量多1-2个，将裂解液RLCK与Carrier RNA溶液颠倒混匀，即得到Carrier RNA工作液；为避免溶液出现起泡现象，请勿使用涡旋振荡。
表1. Carrier RNA工作液的配制
配制数量 | RLCK(ml) | Carrier RNA 水溶液(μl) | 配制数量 | RLCK(ml) | Carrier RNA 水溶液(μl) |
1 | 0.075 | 0.7 | 13 | 0.975 | 9.1 |
2 | 0.15 | 1.4 | 14 | 1.05 | 9.8 |
3 | 0.225 | 2.1 | 15 | 1.125 | 10.5 |
4 | 0.3 | 2.8 | 16 | 1.2 | 11.2 |
5 | 0.375 | 3.5 | 17 | 1.275 | 11.9 |
6 | 0.45 | 4.2 | 18 | 1.35 | 12.6 |
7 | 0.525 | 4.9 | 19 | 1.425 | 13.3 |
8 | 0.6 | 5.6 | 20 | 1.5 | 14 |
9 | 0.675 | 6.3 | 21 | 1.575 | 14.7 |
10 | 0.75 | 7 | 22 | 1.65 | 15.4 |
11 | 0.825 | 7.7 | 23 | 1.725 | 16.1 |
12 | 0.9 | 8.4 | 24 | 1.8 | 16.8 |
八、核酸提取步骤
（一）磁棒法自动化仪器提取步骤（50 ?l液体样品病毒核酸的MagMax Express操作方案）
使用前请先在裂解液RLCK中加入异丙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
1.试剂分装：按下表将各种试剂转移至96孔板的第B,C,D和H排孔中。
孔位 | 试剂名称与用量 |
B排孔 | PWC(使用前请先检查是否已加入无水乙醇): 150 ?l |
C排孔 | PWE(使用前请先检查是否已加入无水乙醇): 150 ?l |
D排孔 | PWE(使用前请先检查是否已加入无水乙醇): 150 ?l |
H排孔 | RNase-Free ddH2O:50 ?l |
注意：A排孔为样品孔，请按照步骤2进行试剂准备。对于50 ?l样本起始量，E,F,G排孔不需要加入任何试剂。
2.样品孔的准备：按下表将Proteinase K、磁珠悬浮液G、病毒样品、裂解液RLCK和Carrier RNA溶液（可选组分）加入96孔板的第A排孔中。
孔位 | 试剂名称与用量 |
A排孔 | 1. 加入5 ?l Proteinase K和5 ?l磁珠悬浮液G。 2. 加入75 ?l 裂解液RLCK或75 ?l Carrier RNA工作液（配制方法见第二页）。 3. 最后加入50 ?l 病毒样品。 |
注意：当样品数目较大时，可以将Proteinase K和磁珠悬浮液G预先混合，该混合液可在2-8℃保存12h。不要将Proteinase K和裂解液RLCK预先混合，否则会降低Proteinase K的活性。如果需要增加微量DNA/RNA得率，可以使用Carrier RNA（客户自备），Carrier RNA工作液配制方法见第二页。
3.打开MagMax Express。把准备好的96孔板放入仪器中，并把磁力外套放入到正确位置。
4.按Start键运行Tiangen-24程序。
5.程序执行完毕后取出DNA或RNA样品并转移至1.5 ml RNase-Free离心管中，保存于-20℃或-80℃。
（二）磁棒法自动化仪器提取步骤（50 ?l液体样品病毒核酸的KingFisher Flex操作方案）
使用前请先在裂解液RLCK中加入异丙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
1.试剂分装：按下表将各种试剂和磁力套转移至96孔板中，并用标签笔标下板的名称。
板的名称 | 试剂名称与用量 |
Elution | RNase-Free ddH2O:50 ?l |
Wash 2_2 | PWE(使用前请先检查是否已加入无水乙醇): 150 ?l |
Wash 2_1 | PWE(使用前请先检查是否已加入无水乙醇): 150 ?l |
Wash 1 | PWC(使用前请先检查是否已加入无水乙醇): 150 ?l |
Tip plate | Comb（磁力套） |
2.样品板的准备：按下表将Proteinase K、磁珠悬浮液G、病毒样品、裂解液RLCK和Carrier RNA溶液（可选组分）加入96孔板中，并用标签笔将板的名称标为Sample。
板的名称 | 试剂名称与用量 |
Sample | 1. 加入5 ?l Proteinase K和5 ?l磁珠悬浮液G。 2. 加入75 ?l 裂解液RLCK或75 ?l Carrier RNA工作液（配制方法见第二页）。 3. 最后加入50 ?l 病毒样品。 |
注意：当样品数目较大时，可以将Proteinase K和磁珠悬浮液G预先混合，该混合液可在2-8℃保存12h。不要将Proteinase K和裂解液RLCK预先混合，否则会降低Proteinase K的活性。如果需要增加微量DNA/RNA得率，可以使用Carrier RNA（客户自备），Carrier RNA工作液配制方法见第二页。
3.将96孔板按照仪器提示放入正确放置后，启动KingFisher BindIt 程序，导
入Tiangen Pure Viral DNA_RNA Kit(Flex-50μl).bdz程序。
4.程序执行完毕后取出DNA或RNA样品并转移至1.5 ml RNase-Free离心管中，保存于-20℃或-80℃。
（三）手工提取步骤（50 ?l液体样品病毒核酸的手工提取操作方案）
使用前请先在裂解液RLCK中加入异丙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
提取步骤：
1.在1.5 ml离心管中加入50 μl血浆/血清/***（样品需平衡至室温）。
2.每孔加入5 μl磁珠悬浮液G（使用前用移液器吹吸或涡旋振荡混匀磁珠）。
3.每孔加入5 ?l Proteinase K。
4.每孔加入75 ?l 裂解液RLCK 或75 μl Carrier RNA工作液（为裂解液RLCK（使用前请先检查是否已加入异丙醇）与Carrier RNA溶液的混合液，配制方法见第二页）。盖上管盖，涡旋振荡10 sec。
注意：当样品数目较大时，可以将Proteinase K和磁珠悬浮液G预先混合，该
混合液可在2-8℃保存12h。不要将Proteinase K和裂解液RLCK预先混合，
否则会降低Proteinase K的活性。如果需要增加微量DNA/RNA得率，可以使
用Carrier RNA（客户自备），Carrier RNA工作液配制方法见第二页。
5.室温孵育10 min，期间每3 min上下颠倒混匀10 sec，使磁珠和核酸充分结合。
6.简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
7.将离心管放置于磁力架上静置1 min，待磁珠完全吸附时小心去除液体。
8.将离心管从磁力架上取下，加入150 μl漂洗液PWC（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀1 min。
9.将离心管放置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
10.将离心管从磁力架上取下，加入150 μl漂洗液PWE（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀1 min。
11.将离心管放置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
12.重复步骤10和11一次。
13.离心管于磁力架上，56℃晾干5-10 min。
注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱核酸。
14.将离心管从磁力架上取下，加入50 μl RNase-Free ddH2O，室温振荡混匀5 min。
15.将离心管放置于磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，小心将核酸溶液转移至一个新离心管(自备)中，并于适当条件保存。
注：如需整合其它磁棒法或移液法自动化核酸提取仪器请与大有泰莱联系。
北京大有泰莱生物技术有限公司成立于2014年10月，是注册在中关村科技园区海淀创业园的高科技企业。公司主要从事食品安全检测技术和动物疫病诊断技术的开发和产品研制生产及销售，拥有自主知识产权的原料制作工艺和产品生产工艺。主要技术平台为基于细胞技术的酶联***技术和分子生物学PCR检测技术平台。即通过细胞培养获得产品研制和生产所需原材料，开发出各种酶联***检测试剂盒，和通过基因合成获得引物和探针，进而开发出各种PCR检测试剂。其他相关技术为光机电一体化、移动互联网技术、云存储及物联网技术等。主要产品为食品安全残留（***、激素、违禁添加物等）检测试剂盒和目前农业部重点监控的动物疫病检测试剂盒，前者主要用酶联***技术，后者主要用酶联***技术和PCR技术，主要面对客户为经济动物养殖企业、屠宰企业、***食品安全及动物疫病监管部门，市场区域覆盖全国各省市县，将来计划将产品辐射到中东和东南亚地区。 ? ? 北京大有泰莱生物技术有限公司传承业内诊断试剂研发生产的经验，借鉴和学习国际***技术，不仅在多个技术领域如：酶联***技术、PCR技术、***亲和层析、***磁珠、数字PCR技术、二代测序技术等均有较强的技术储备，而且还相应开发出了一系列的具有国际竞争力的检测诊断产品。公司引进国外***的产品考评体系和生产环节质量控制体系，保障了诊断试剂的批量供应和高标准的品质。目前公司已成功开发产品20余种，多个产品技术指标属业内***。公司和国内外多个国家和地方科研单位和实验室广泛开展合作，团队成员专业覆盖面广，技术实力强。除了传统的兽医学、微生物学、***化学、***学、分子生物学、光机电等学科外，公司创始团队还融合了其他多个学科专业，如互联网、移动信息技术、云存储、大数据等IT专业技术以及3D打印、纳米材料等其他材料及成型技术。所开发产品受到国内外用户的一致好评。 ? ? 公司从创办伊始就确立了以自主创新为基础、以市场为导向、以客户为中心、以员工为根本的管理思想。公司集产品研发、生产、销售、技术培训于一体，通过团队协作与相互信任，实现高效运转和市场多赢。公司拥有优秀的人才队伍、***的仪器设备、规范化的生产和管理，为***的产品提供了有力保障。公司将乘政策东风而上，紧密结合市场的讯息，在广大用户和合作伙伴的支持下，我们必将倍加努力，为百姓食品安全做出更好的贡献。
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